Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit(小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA试剂盒)(PB062)

碧云天的Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit (Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠B细胞刺激因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的BAFF/BLyS/TNFSF13B的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为58pg/ml，与小鼠APRIL、BAFF R/Fc Chimera、人BAFF没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。

B细胞活化因子(B-cell activating factor, BAFF)，又称BLyS, TALL-1, THANK和TNFSF13B，是TNF家族成员之一，其具有维持B细胞存活和成熟的功能。小鼠BAFF是一种分子量为32kDa的II型跨膜蛋白，在血液中存在18kDa的游离型BAFF。小鼠BAFF的N端TNF同源区包含有一个furin酶切位点(RNRR)，经酶切作用后即可得到游离型BAFF。多种类型的细胞和组织均能够产生BAFF，例如单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、T淋巴细胞、脾脏、淋巴结和骨髓等。通常BAFF被认为以同型三聚体的形式存在，但有时也会与另一种TNFSF成员APRIL组成杂聚体。

BAFF至少具有3种受体：B细胞成熟抗原(BCMA/TNFRSF17)、跨膜激活剂及钙调亲环素配基相互作用因子(TACI/TNFRSF13B)和BAFF受体(BAFF R/BR3/TNFRSF13C)，三者都属于TNF受体家族。其中TACI和BCMA不仅能够识别BAFF，也能够与APRIL相互作用，BAFF R仅能特异性与BAFF结合。三种受体均主要表达在B细胞表面。BAFF与受体结合，主要调控B细胞的存活和成熟。BAFF敲除的小鼠会出现淋巴结和脾脏中滤泡和边缘B细胞的减少，但是骨髓细胞和腹膜的B1细胞将不受影响。BAFF的过表达会导致小鼠脾脏和淋巴结中B细胞数量升高，并且小鼠会表现出明显的自身免疫疾病相关特征，例如自身抗体水平升高、肾脏中免疫球蛋白减少和肾小球性肾炎及伴随的肾功能衰竭。结合相关临床数据，研究人员认为BAFF有可能能够成为自身免疫性疾病治疗的新靶点。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B的浓度，其原理见图1。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗体后，生物素化抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗体与小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。